一抗孵育时间，不能超过多久

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　　一抗孵化时间与温度和抗体浓度有关。一般来说，37℃孵化约1-2小时。

　　在室温下，孵化约3小时。℃在这种情况下，孵化大约需要18-24小时。

　　如果抗浓度过高或孵化时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤难度，最终因洗涤不彻底而出现非特异性颜色。

　　第一抗体是指能够与非抗体抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白质，通常称为抗体。

　　第二抗体是指能够与抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，扩大第一抗体的信号。

　　(1)一抗孵化时间与温度和抗体浓度有关。

　　一般来说，37℃孵化约1-2小时。在室温下，孵化约3小时。

　　℃孵化约18-24小时。

　　(2)如果抗浓度过高或孵化时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤难度，最终会因洗涤不彻底而出现非特异性显色。

　　用0.05M碳酸盐包装缓冲液（ph9.6)稀释抗体，直到蛋白质含量为1-10μg/ml到目前为止。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加入0.1ml，4℃**。

　　第二天，去掉孔内溶液，每次用洗涤缓冲液洗3次3分钟。

　　将0.1ml稀释待检样品放入37反应孔中℃在环境条件下孵化1小时，然后清洗。

　　在每个反应孔中加入0.1ml37℃在环境条件下，孵育0.5-1小时1小时。

　　在每个反应孔中加入0.1mlTMB37底物溶液(应临时准备)℃10-30分钟的环境条件。

　　在每个反应孔中加入0.05ml的2M硫酸。

　　(1)用肉眼观察白色背景。

　　反应孔内颜色越深，阳性越强，阴性反应无色或极浅。

　　（2）在ELISA在探测器上，450nm（若以ABTS显色，则410nm）在空白对照孔调零后，测量每个孔O·D如果值大于规定的阴性比较OD2.1倍值为阳性。