甘油菌菌种活化步骤，甘油菌怎么保存

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　　1、LB准备10个培养基g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g加入800氯化钠ml去离子水，搅拌均匀，直到完全溶解，然后用0.2ml氢氧化钠（5mol/L）将ph调节到7.4，并加入1L去离子水，高压蒸汽灭菌。2、

　　倒平板：培养基放置在60℃将培养基轻轻转动，使琼脂分布均匀。

　　（1）准备10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化钠加入8000ml去离子水，搅拌均匀，直到完全溶解，然后使用0.2ml氢氧化钠(5mol/L）将ph调整到7.4左右，加1L去离子水，高压蒸汽灭菌约20分钟。

　　(2)高压灭菌前应加入15g/L(铺平板)或7g/L琼脂糖(用于制备顶层琼脂糖)。

　　(1)用紫外线消毒超净台、接种环、培养皿、酒精灯约30分钟。

　　(2)高压灭菌后的培养基放置在60℃将培养基取出，轻轻转动，使琼脂均匀分布在培养基溶液中，直到溶液尚未冷却。

　　(3)等到冷却到50℃在超净台中加入抗生素，旋转将培养基混合均匀，然后将培养基倒入烧瓶中铺平。

　　(4)将甘油菌冻存管放在冰上，直接用接种环蘸在冻存管内的冰渣上，然后涂上平板。

　　(1)冷却至50℃加入抗生素，然后将菌落挑至已加入抗生素的液体培养基(2-5ml），37℃，200rpm培养8小时左右。

　　(2)抗生素液体按1：500-1000的比例添加LB培养基稀释上一步获得的菌液(20-25)μL菌液25ml液态LB培养基），37℃，200rpm培养12-16小时。

　　如果是20%甘油(甘油：菌液)=20：80)一般放在零下70℃保存在环境中。

　　如果是普通细菌，纯化后在普通肉汤管中接种，然后加入适量甘油-生理盐水保存液4-6小时，零下20℃保存在环境中。如果是链球菌属和奈瑟菌属菌种，纯化后在血清肉汤管中接种5-10%CO2中加入适量甘油-生理盐水保存液8-10小时后，放入零下80℃保存在环境中。

　　如果是真菌，纯化后直接取菌洗肉汤，加入甘油-生理盐水保存液，放在零下20℃保存在环境中。