菌种保存 菌种保存甘油浓度

2.《微生物学实验指导》

相关问答拓展:

1、保藏菌种的方法有哪些？

保存方法：

（一）培养基保存法

利用各种斜面和半固体培养基，加上石蜡油保存菌种，是一种最常用而又简易的保存方法。

1.普通琼脂斜面保存法：肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏汤，以防干涸。经35℃培养18～24h后，移种于4℃冰箱中，一般可保存一个月，每月传代一次。

2.**琼脂斜面保存法：链球菌、肺炎链球菌应接种于**琼脂斜面上，35℃培养生长后，置4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球菌的新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次。

3.巧克力色斜面保存法：宜保存脑膜炎奈瑟菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。

4.鸡蛋斜面保存法：适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌，一般可保存一个月。

5.半固体穿刺保存法：将细菌接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内，经35℃培养18～24h，再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm，置4℃冰箱保存。保存时间可达3～6个月。

（二）干燥保存法

原理是将细菌体内的水分蒸发掉，使其处于休眠和代谢停滞状态，从而达到长期保存菌种的目的医|学教|育网搜集整理。菌种干燥后低温保存，可保存数年至十几年。

（三）冷冻干燥保存法

本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于菌种保存的因素（低温、干燥和缺氧等），是目前最有效的菌种保存方法之一。用本法保存的菌种具有成活率高，变异性小等优点，保存期一般3～5年，有的可长达10年以上。

2、平菇菌种保存条件？

平菇母种外包装采用无毒、无污染、有足够硬度的坚固材质，内部采用无毒、无污染，且具有缓冲作用的轻质材料填满，包装物密封。在0℃~4℃条件下贮存，时间不超过90天。平菇原种和栽培种外包装采用有足够强度的瓦楞纸箱，内部用无毒、无污染，具有缓冲作用的轻质材料填满、密封。应尽快使用，在24℃条件下贮存不超过10天，在0℃~4℃条件下贮存，时间不超过40天。

3、菌怎么保存冰箱？

斜面低温保存法

这是最简便最普通的保存方法。即将菌丝生长良好的斜面菌种,置于冰箱内;在4℃左右低温下保存;以后每隔2~3个月转管移接一次。这种保存方法适于大多数食用菌菌种。

为了延长保存时间,试管口处要用塑料薄膜包扎,以防培养基干固。在农村没有冰箱设备的,可把母种试管,用石蜡封口,再用塑料薄膜包封,沉放于清凉的井底保存。

2.液体石蜡保存法

食用菌的菌丝体都可用此法保存,方法简单,只在斜面菌种试管内,注入一层已灭过菌的液体石蜡,注入量以高出斜面1厘米为宜,使菌种与空气隔绝,降低其新陈代谢的活动,然后在棉塞外包以塑料薄膜,直立存放于室内干燥处或低温下保存,一般可保存一年以上。

使用液体石蜡菌种时,只要用接种计从斜面上挑取少许菌体,放在新鲜的培养基上;经过培养,即可应用。原种则重新蜡封,继续保存。

4、em菌种保存方法？

首先温度一定要合适，最好是对比较恒定的温度下来保存，对于那种粉剂EM菌来说，一定要放在温度低的地方，通常来说保存环境中的温度以15度以下为好，这样菌会处于一个休眠的状态下，可以延长菌的存活时间，到时激活之后可提高其活力和纯度；如是买的水剂EM菌，则可以将其放在通风阴凉处来保存，温度以在控制在20度以下为好，同样是温度过高的话会影响到菌的活度。

做好遮光，EM菌在保存过程中最怕太阳晒，太阳的照射会直接影响到菌的存活率，特别是水剂类的菌，如放在太阳下，温度一高很可能会将里面的菌全部杀死，而且温度高时菌的活力提高但这时菌的存活时间会变短，同时会产生一些气体，这种对包装瓶影响大，严重时可能会因瓶内的气体膨胀而将包装瓶胀破。

保存过程中尽量少动，对于水剂EM菌来说，在保存过程中尽量少去搬运，保存过程中经常去搬运或改变环境时，瓶内的菌因温度变化过大有时也会死掉一些。另外，搬运过程中如震动过大瓶子里面会产生一些气体，同样易破坏包装瓶。

拓展好文：常用菌种的传代与保存方法

　　一、菌株概念及传代

　　（1）标准菌株：直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株。通常默认为第0代菌株。

　　（2）标准储备菌株：将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株。通常为第1代或第2代菌株。

　　（3）储备菌株：从标准储备菌株转接一代获得的培养物。通常为第2代或第3代菌株。

　　（4）工作菌株：由标准储备菌株、储备菌株或标准物质（经证明或未经证明）转接一代获得的菌株。通常为第3-5代菌。

　　传代：每一次的转接培养都是一次传代的过程，可以使用液体、固体或半固体培养基。

　　注意事项：菌株传代只能由上往下传，储备菌株可以做为工作菌株使用，但工作菌株不能做为储备菌株使用。实验室使用的工作菌株一般不可超过第5代，除非标准方法中有明确要求，或实验室能够证明菌株相关特性没有改变。若在传代过程中出现明显变异，也不可继续使用。

　　二、菌种保存的基本原理

　　使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态，也就是使微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内。干燥、低温和隔绝空气是保证获得这种状态的主要措施。有针对性地创造干燥、低温和隔绝空气的外界条件，就是微生物菌种保藏的基本技术。

　　三、菌种保存的常用方法

　　（1）斜面保存法

　　操作方法：将营养琼脂（或其他适宜的琼脂培养基）加热煮沸溶解后分装至试管中，灭菌后摆长斜面凝固，挑取菌落“之”字形划线接种至培养基斜面，置于合适的条件中进行培养。培养结束后，置2-8℃冷藏保存（部分菌株会在4℃产生自溶，如铜绿假单胞菌。副溶血性弧菌等，可置室温保存）。

　　此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，操作简单，使用方便，但易变异，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状，污染杂菌的机会亦较多。霉菌、酵母菌、放线菌和芽孢菌一般保存2-4个月传代一次，细菌一般保存一个月传代一次。

　　斜面保存法

　　（2）液体石蜡保存法

　　操作方法：将营养琼脂（或其他适宜的琼脂培养基）加热煮沸溶解，分装至试管中灭菌后摆长斜面，或使用半固体培养基加热煮沸溶解后分装至小试管，灭菌后摆直立，挑取菌落“之”字形划线接种至培养基斜面或穿刺接种至半固体培养基管，置于合适的条件中进行培养。培养结束后，在培养基表面覆盖一层无菌液体石蜡，2-8℃冷藏保存。

　　液体石蜡一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。此法比斜面保存法的保存期限更长，霉菌、酵母菌、放线菌、芽孢菌可保存1-2年甚至更长时间，多数无芽孢菌也可保存到一年以上。

　　（3）甘油冻存保存法

　　操作方法：挑取菌落至液体菌种保存管中（商品化的液体菌种保存管中已加入甘油，直接使用即可；若自行配制，可在冻存液中加入15%-50%比例的甘油，或将菌液与无菌甘油溶液混合），用移液枪吹打均匀，制成约109CFU/mL的菌悬液，置于超低温冰箱中或液氮罐中冷冻保存（霉菌可挑取孢子冻存，保存温度越低效果越好，长期保存建议在-70℃以下冻存）。

　　该方法适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。-20℃保存时间较短，一般可保存一年左右，-70℃以下可保存较长时间，一般至少可保存两年以上，有些菌种甚至可保存十年以上。

　　注意事项：反复冻融易导致菌株死亡，在中国药典中规定，融化后的菌种保存管不可再进行冷冻保存。

　　液体菌种保存管（含甘油）

　　（4）真空冷冻干燥保存法

　　通常以牛**为载体，加入菌株制成菌悬液，使用真空冻干机器进行脱水冻干处理，制成冻干粉。相比较于其他保存方法，真空冷冻保存法更容易保存菌种的活力，延长保存时间，适用于98%以上菌种的保存，但操作复杂，一般实验室难以使用。

　　（5）载体保存法

　　以沙土、滤纸、硅胶等材料做为载体吸附菌株，通过五氧化二磷干燥保藏的方法。保藏时间长，应用较为广泛，但一般实验室通常不易操作。

　　（6）瓷珠保存法

　　瓷珠菌种保存管是实验室保存菌种的容器，管内有表面凹孔小瓷珠用于细菌的吸附和保存，甘油做为抗冻保护剂可减少冷冻过程中形成的冰晶，瓷珠菌种保存管放置于-20℃或-80℃下便可创造干燥、低温、缺营养的环境，使菌株处于“休眠”状态，方可长期保存（视不同菌种与保存温度，一般可保存3-10年），同时菌种保存管的取用和保存较为便利（取用复苏及保存菌株仅需1分钟）。

　　保存方法：挑取平板或斜面上的新鲜纯培养物于菌种保存管中，配成大约3-4麦氏比浊度的菌悬液，盖上盖子来回颠倒几次使细菌乳化，用无菌移液器将菌种保存管内的液体吸取干净，仅留下瓷珠，拧紧保存管，迅速将其置于-20℃或-70℃冰箱中。

　　使用方法：无菌条件下，用灭过菌的针或者镊子取出一个小瓷珠，将小瓷珠直接用作平板划线或加到合适的液体培养基中，置合适的条件下进行培养即可。

　　瓷珠菌种保存管

　　四、实验室常用菌种的保存方法

　　（1）短期、中期保存：葡萄球菌、沙门氏菌、埃希氏菌、志贺氏菌、假单胞菌、假单胞菌、李斯特氏菌等，可使用营养琼脂斜面或TSA斜面4℃保存（铜绿假单胞菌在4℃会出现自溶，可以置室温保存），通常可保存1-3个月。白色念珠菌、酵母菌、霉菌等可使用沙氏葡萄糖琼脂斜面4℃保存，通常可保存3-6个月。生孢梭菌、产气荚膜梭菌可使用疱肉培养基培养后置4℃保存，可存活数月至1年以上。

　　（2）长期保存：对于大多数的细菌、真菌，普通实验室都可以选用瓷珠保存法或甘油保存法置-20℃以下或-70℃以下冻存，温度越低保存时间越长。（注：保存霉菌时挑取孢子冻存即可；保存厌氧菌建议使用甘油保存法，避免反复冻融；使用甘油冻存法保存弯曲杆菌、螺杆菌、嗜血杆菌等细菌时，加入5%-10%比例的脱纤维羊血效果更佳）。

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